肿瘤免疫治疗新贵——CAR-T(2)

　　由于肿瘤细胞具有异质性，一部分肿瘤细胞不具有可被T细胞特异性识别的抗原，无法被传统的CAR-T细胞识别并清除。这一问题或可通过四代CAR-T技术，募集除T细胞以外的免疫细胞至肿瘤所在区域来解决。四代CAR-T细胞又被称为TRUCK T细胞，含有一个活化T细胞核因子（NFAT）转录相应元件，可以使CAR-T细胞在肿瘤区域分泌特定的细胞因子（目前主要是IL-12），从而修饰肿瘤微环境，募集并活化其他免疫细胞进行免疫反应。目前，四代CAR-T疗法已经在包括神经母细胞瘤在内的实体瘤中开展临床试验。

　　第二代CAR-T有较多的临床数据支持，稳定性高且技术工艺较为成熟，是目前的主流技术。未来，随着新结构在临床上的试验推广及生产工艺的改进，第三代、第四代CAR-T产品更为优良的疗效值得期待。

　　CAR-T技术是靶向某一种抗原，而不是针对单一肿瘤疾病，因此靶点的选择是CAR-T有效性和安全性的基础。CAR-T靶向的肿瘤抗原可分为两类：一类是肿瘤特异性抗原，是最理想的抗原。靶点抗原的特异性越高，CAR-T细胞就可越专一地针对特定的肿瘤细胞，对正常细胞不作用，从而降低不良反应。但这种理想的抗原不多，目前受到关注的有表皮生长因子受体EFGRvIII和前列腺特异性膜抗原PSMA等。还有一类是肿瘤相关抗原，其在肿瘤细胞表面过度表达，在正常组织中低表达，目前大部分应用的肿瘤抗原靶点都是这种。

　　目前应用于临床最成功的案例是以CD19为靶点构建的CAR-T，但其适应证局限在B细胞相关的血液肿瘤中，如B系淋巴细胞白血病（急性、慢性）以及非霍奇金淋巴瘤（弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤等）。

　　据Cell Trials的统计，截至2017年10月，全球大约50%的CAR-T临床试验针对CD19靶向抗原，另有一小部分（约6%）使用的是由CD19与另一抗原组成的组合抗原。除了CD19，CAR-T在血液肿瘤治疗方面还有许多其他抗原，其中BCMA、CD22、CD20较为常见。BCMA正在成为CAR-T治疗的热门靶点。

　　2018年中国肿瘤登记年报数据显示，我国发病率最高的前10种癌症均为实体瘤，占全部癌症的比例高达77%。但实体瘤靶点的研发较为困难，相关研发任重道远。目前针对实体瘤，以间皮素为靶点的CAR-T临床试验数量最多，针对磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）靶点治疗肝癌、双唾液酸神经节苷脂2（GD2）靶点治疗神经母细胞瘤以及针对CEA靶点治疗肠癌的CAR-T疗法也受到了广泛关注。

　　CAR是以抗体的scFv（单链可变区）识别肿瘤抗原的，所以CAR-T的研发需要获取和筛选单抗。筛选出亲和力高的单抗后，将相应的杂交瘤细胞冻存传代形成稳定的细胞株，用于CAR结构中scFv序列的构建。